体细胞介导的核移植中转基因供体细胞的选择方法探 讨及乳腺特异表达 hBPI 载体的构建

利用动物乳腺生物反应器生产的重组蛋白具有活性好、易提纯、产量高、 成本低等特点，已经作为一种新的生物制药模式崭露头角。选择高效的乳腺特异调控元件、合适的目的基因以及有效的表达载体转入动物体内的方法等是乳腺生物反应器制中的重要环节。本研究选择携带β 酪蛋白启动子等调控序列的pBC1 GFP为乳腺特异表达载体，以核移技术作为表达载体转入动物体内的方法，探讨了一种共转染方法在成年绵羊体细胞介导的核移技术中对于转基因供体细胞选择的可行性。继而，选择一种人体内天然抗感染的分子靶人杀菌透性增加蛋白（hBPI）的cDNA作为目的基因。从新疆维吾尔族健康人造血干细胞中提取总RNA，用反转录和降落PCR相结合的方法扩增得到hBPI的cDNA，将其克隆到pEGFP-N1载体上（命为pEB1），并进行DNA序列测定。然后，探讨hBPI在人乳腺癌细胞MCF-7中的表达和亚细胞定位。最后，构建了乳腺特异表达人细菌透性增加蛋白载体。通过PCR反应和双轮PCR反应分别得到带有自身信号肽或山羊酪蛋白信号肽的hBPIcDNA，连入pBC1载体上，成功地构建了两个乳腺特异表达载体pBC1-BPI1和pBC1-BPI2。以上研究为首次用体细胞介导的核移植的方法在动物乳腺中表达人细菌透性增加蛋白做好了准备工作。