本研究从山羊角膜缘干细胞分离、培养入手，系统比较了原代角膜缘干细胞的分离方法，优化了角膜缘干细胞有血清培养体系，建立了角膜缘干细胞无血清培养体系。对分离富集的角膜缘干细胞体外连续传代后，液氮中冻存。解冻后，对其干细胞相关特性进行研究，并对其体外多项分化潜能进行研究。本研究以人羊膜为载体负载冻存角膜缘干细胞，在无饲养层无血清的培养体系中构建组织工程化角膜上皮，手术移植给角膜干细胞缺损模型羊眼表，结合药物使用抑制免疫排斥反应，最后对其移植治疗效果进行综合评价。实验结果表明：冻存角膜缘上皮干细胞联合去上皮羊膜支架，体外可以成功构建组织工程角膜上皮，通过角膜移植手术，可以重建角膜受损动物眼表。修复机理可能是：外源移植的异体干细胞抑制了自身周围结膜以及血管向中央角膜上皮的生长，从而参与了角膜上皮的修复过程，实现角膜上皮重建。